Comment sélectionner les colonnes en HPLC

Une Chromatographie en phase liquide à haute performance ou HPLC, colonne se compose d'un cylindre métallique garnie de perles de silice minuscules utilisées pour séparer les composés en mélange, tels que des médicaments, des hormones ou des protéines. Le mélange liquide est pompé à travers la colonne en utilisant la haute pression, ce qui entraîne chaque composant dans le mélange sortant des moments différents. Choisir la bonne colonne en fonction du type de composé que vous essayez d'analyser est important dans la réalisation des données optimales.

Instructions

1 Les billes de silice dans la colonne sont poreuses, et en choisissant la taille des pores dépend de la taille des molécules étant séparées. Les petites molécules nécessitent une taille de pores inférieure à 100 angströms, et de grosses molécules telles que les protéines, nécessitent une taille de pores supérieure à 300 angströms. Une taille de pores inférieure augmente les performances de la colonne, mais va générer plus de pression du système.

2 Déterminer la longueur de la colonne nécessaire en déterminant le nombre de composés et de ce type de composés, vous devez séparer. la longueur des colonnes varie entre 5 et 25 centimètres. colonnes longues offrent une meilleure résolution et d'efficacité, mais nécessitent de plus longues durées de rétention et de pression plus élevée. Il est préférable de choisir la colonne la plus courte possible, tout en conservant une résolution adéquate.

3 Si la résolution est insuffisante, ce qui diminue le diamètre interne de la colonne sera utile. diamètres plus petits vont augmenter l'efficacité et de la résolution, mais il faut un débit plus faible de solvant et, par conséquent, augmente le temps de l'analyse. Gardez à l'esprit que toutes les impuretés, telles que la saleté, vont rapidement obstruer la colonne avec de petits diamètres internes.

4 Déterminer la taille des billes de silice que vous prévoyez d'utiliser pour votre colonne. La plupart des colonnes ont une taille de particules de silice de 5 um. la taille des particules plus petites, telles que 3 um, offrira une plus grande séparation et diminuera le temps de l'analyse. Toutefois, les particules plus petites nécessitent une plus grande quantité de pression pour pousser le mélange à travers la colonne.

Conseils et avertissements

  • Chaque approche dans le choix d'une colonne pour l'analyse porte un avantage et un inconvénient. Il appartient à l'utilisateur de choisir chaque aspect avec soin pour atteindre un équilibre optimal dans la séparation, l'efficacité et la pression dans le système.